荧光的参数

（1）激发光谱：发光材料在不同波长光的激发下，该材料的某一发光谱线与谱带的强度或发光效率与激发光波长的关系。

（2）发射光谱：发光材料在某一激发光的激发下，其不同波长的发光强度的强弱变化。

（3）荧光强度：荧光强度与该种物质的荧光量子产率、消光系数以及含量等因素有关。

（4）荧光量子产率Q：量子产率表示物质将吸收的光能转化为荧光的本领，是荧光物质发出光子数与吸收光子数的比值。

（5）斯托克司(Stokes)位移：斯托克司位移为最大荧光发射波长与最大吸收波长之差。

（6）荧光寿命：当一束光激发荧光物质时，荧光物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态，再以辐射的形式发出荧光回到基态，激发停止时，分子的荧光强度降低到激发时最大强度的1/e时所需的时间为荧光寿命。

比较荧光强度没有统一曝光条件可以调整显微镜。

拿一张荧光最强的样品观察调整显微镜。确定相机拍摄的曝光时间。

荧光测试参数条件不一样，比如扫描速率、狭缝设置、增益强度等，如果这些参数一致，结果强度不一样。

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不相同。每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后又产生特定波长荧光。通过一些波长选择通透性滤光片，可将不同波长的散射光、荧光信号区分开。选择不同的单克隆抗体及荧光染料可以利用流式细胞仪同时测定一个细胞上的多个不同特征。

（一）荧光信号测量与放大器

线性放大器用于测量信号强度变化范围较小的信号或具有生物学线性过程的信号，如前向散射光的测量与CD3+细胞DNA指数的测量。

对数放大器用于测量信号强度变化范围较大且其光谱信号较复杂的信号，在免疫测量中最常使用。

（二）荧光补偿

依靠滤光片是不能完全阻挡干扰信号，在每两种荧光的发射光信号中仍有不可避免的重叠现象。该重叠区越大，信号检测的准确性越差。通常采用荧光补偿的方法来消除重叠信号，保证检测信号的准确性。

待测物质方面

1含共轭π键体系，体系越大荧光越强

2刚性平面构型，刚性平面越大，荧光强度越大

3取代基的影响，给电子取代基加强，吸电子取代基减弱

4最低电子激发单重态性质，π-π跃迁比n-π跃迁产生更强的荧光

环境方面

1溶剂，溶剂弛豫造成吸收发射间的能极差，溶剂的极性增大会使荧光光谱发生红移，氢键也有一定影响

2介质酸碱性，视待测物的酸碱性与结构而定

3介质的温度和黏度，温度越高强度越小，黏度越大强度越大

4有序介质(如表面活性剂)的影响，有序介质的存在会使强度增大

经供参考

物质的荧光强度与以下因素有关：

1、跃迁类型：通常，具有π—π及n—π跃迁结构的分子才会产生荧光。而且具π—π跃迁的量子效率比n—π跃迁的要大得多（前者大、寿命短、kISC小）。

2、共轭效应：共轭度越大，荧光越强。

3、刚性结构：分子刚性（Rigidity）越强，分子振动少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高。如荧光素（φ大）与酚酞（φ=0）；芴（φ=1）与联苯（φ=018）。

4、取代基：（1）给电子取代基增强荧光（p-π共轭），如-OH、-OR、-NH2、-CN、NR2等；（2）吸电子基降低荧光，如-COOH、-C=O、-NO2、-NO、-X等；（3）重原子降低荧光但增强磷光，如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐减弱到消失，该现象也称重原子效应。

5、溶剂效应：（1）溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变π—π及n—π跃迁的能量）；（2）与溶剂作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度。

荧光（fluorescence）是一种光致冷发光现象：

当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出出射光（通常波长比入射光的的波长长，在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。

具有这种性质的出射光就被称之为荧光。一般以持续发光时间来分辨荧光或磷光，持续发光时间短于10-8秒的称为荧光，持续发光时间长于10-8秒的称为磷光。在日常生活中，人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光。