如何使目的基因与质粒结合形成重组质粒？

先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒。

质粒是目的基因的运载体，在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后，用限制性内切酶将质粒切开，使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端。它们的碱基恰好配对，氢键自动结合，再用DNA连接酶将切口补上，重组质粒就形成了。

扩展资料

有两种情况可使杂交后代出现新的基因组合的个体（重组体）：

（1）非连锁基因的自由组合。例如纯合的非糯红米水稻品种与糯性白米水稻品种杂交，子二代有四种类型的植株，其中非糯红米和糯性白米的植株分别与两亲本的性状相同，称为亲本组合；另有非糯白米和糯性红米两种植株则是两亲本所没有的重新组合，即重组体。

（2）连锁基因的交换。例如，已知玉米种子的有色对无色为显性，饱满对凹陷为显性，用纯种有色饱满玉米与无色凹陷玉米杂交，子一代种子均为有色饱满，以F1与双隐性（无色凹陷）亲本回交，结果也出现四种类型，其中有色饱满和无色凹陷为亲本组合，约占96%；有色凹陷和无色饱满为新组合（重组体），约占4%，后者就是同源染色体的非姊妹染色单体上部分基因发生了交换的结果。

设计一对引物，针对基因两端（覆盖酶切位点），在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基，扩增以后，酶切产物和空载体，再连接一遍，转化，小提拿去测序。

最好上游换另一个内切酶位点，这样方便双酶切检测，区别于原来的质粒。

（1）①表示用限制性内切酶对供体细胞所有DNA进行切割，这样得到的DNA片段中含有或不含有目的基因．

（2）质粒是一种小型环状DNA分子；一般来说，质粒所表达的产物不是细胞生存所必需的．

（3）③表示基因表达载体的构建过程，该过程首先需用同种限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．

（4）将目的基因导入细菌细胞采用感受态细胞法，即用氯化钙处理细胞，以增大细菌细胞壁的通透性，有利于重组质粒进入细胞．此外，还要在细菌培养基中加入抗菌药物，以便筛选出转化细胞，因此这类培养基属于选择培养基，能在此培养基上生存并增殖的细菌就是接受了重组质粒的细菌．

（5）重组质粒在宿主细胞中大量复制，就会使目的基因得到扩增．

（6）过程⑥需要将重组质粒上的目的基因分离纯化出来，首先可用①③过程中曾使用过的那种限制性内切酶，将目的基因与原质粒部分分割开，然后可用离心分离等适当方法得到纯化的目的基因DNA片段．

故答案为：

（1）限制性内切    目的基因

（2）环状DNA分子    不是

（3）限制性内切   DNA连接

（4）细菌细胞壁    重组质粒进入细胞    抗菌药物    选择培养基

（5）目的基因得到扩增

（6）①③限制性内切   离心分离

方法非常多，列举一两个：

1

不同的粘性末端不能相连。所以，如果要相连，就要去除不同的粘性末端，进行平末端相连。

粘末端变成平末端有两种方法：klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。

为了减少载体自连，可以用碱性磷酸酶处理载体。

最后将载体和目的基因链接，构建重组质粒。

2

设计引物，自带酶切位点，扩增目的基因，直接改变目的基因的酶切位点，然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因，切出相同的粘性末端。

直接将酶切完成的目的基因和载体连接。