溴酚蓝会被核酸染料染色吗

溴酚蓝会被核酸染料染色吗,第1张

不会。在电泳过程中,常使用一种有颜色的标记物以指示样品的迁移过程。核酸电泳常用的指示剂有两种:溴酚蓝,呈蓝紫色;二甲苯青,呈蓝色。故溴酚蓝是核酸的指示剂,能使核酸呈蓝紫色,他不会被别的核酸染料染色。

Loading buffer即常用的电泳上样缓冲液,工作浓度是1X 。由于点样孔容量有限,所以如果你样品浓度过高可以用低倍数,样品浓度低就用高倍数,以便load更多的样品。

1核酸电泳中loading buffer的作用:

(1)指示作用:内含剂溴酚蓝和二甲苯氰,显示电泳的进程,以便适时终止电泳;

a 溴酚蓝:前面的紫蓝色条带,在06%、1%、14%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、06Kb、02Kb和015Kb的双链线性DNA片段大致相同;

b 二甲苯氰:后面的蓝色条带,它在1%和14%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和16Kb的双链线性DNA大致相似;

(2)沉降样品:成分甘油可以加大样品密度,使沉到点样孔中防止样品飘出;

(3)变性聚合酶:SDS主要是促使聚合酶变性,避免其结合在DNA双链上影响迁移速率。

2蛋白电泳中,蛋白样品在定量完毕,经过loading煮完后,可以相对稳定保存,loading buffer在蛋白电泳中的作用:

(1)溴酚蓝指示电泳位置、使样品沉入点样孔;

(2)内含还原剂破坏二硫键,而不会破坏蛋白质的一级结构,不影响WB检测,因为WB主要只是测蛋白表达量,而不需要蛋白的高级结构;

(3)使SDS与蛋白按比例结合,使蛋白表面均匀带上负电荷(具体原理参考 https://wwwjianshucom/p/1d1358ed6bf9 里面的SDS lysis buffer部分);

(4)煮沸使蛋白酶失活,中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解;

(5)煮沸使DNA充分打断变性;

好的,传说中就是如下三个:1loading buffer含有EDTA,就是传说中的螯合剂,螯合镁离子,防止DNA被降解2loading buffer含有蔗糖(或者甘油或者聚蔗糖,反正就是比重大的东西),就是传说中的砖头,样品揣着这块砖头就在

没必要。DNA结构简单,由四种碱基组成,同样100bp速度接近。而蛋白由20种AA组成,各蛋白组成差别大所以DNA电泳,不用浓缩胶就可以跑得很好。没必要用浓缩胶。浓缩胶是在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为两种,负极的加样侧一般浓度为2%5%,称为浓缩胶。

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