小鼠精子中RNA的提取应该注意什么

小鼠精子中RNA的提取应该注意什么

动植物样品的采集及DNA 样品的提取

1 动物样品的采集及处理方法

遗传学数据在野生动物和圈养动物的保护和管理中变得日益重要。在本文中，我们总结了

一些能简便而有效地获得样品及数据的方法。

我们在采集样品之前，最好对将要进行的遗传学分析有所了解。然而，采集者并非都是研

究者，当采集地与实验室有相当距离时，采集者常常要保存好样品直到有合适的接受者或存放

地，这就要求采集者应具备一定的经验。

首先，所有样品均应以个体序号进行标注，并且应写上种名、性别、采样者姓名以及采集

日期，越详尽越好，以便同一个体的不同类数据可以相互引用，另外，地理来源的标注也很重

要，需要注明。对于野外捕获的动物，有条件者最好在地图上标明捕获地及其经纬度。对圈养

动物的每个野外捕获种源都要有同样的记录和详尽的谱系图，因为谱系图可用于计算近交系数。

总之，背景资料越详细越好，即使不能得到这里所列的全部信息，也要尽可能详尽。

l．1 样品的测量方法

在一定数量的分类群中采用的标准测量方法可用于以下四个方面：

（1）分类学上：一套理想的测量方法应能大致上重建机体每个主要硬件部分的形状和大小。

（2）不对称性分析：机体各部分的起伏不对称，也许表明进化过程在一定程度上正在变得

不稳定，这可能是环境压力或近交的结果。测量不对称时机体左右两部分均应考虑在内。

（3）遗传变异：在科级水平上，如果对同一年龄的个体采用同样的测量方法，就有可能对

所选特征中的遗传成分变异进行粗略的估计。虽然并非总是能做到这样，但能使遗传学家对所

选特征（如生殖特征方面遗传变异的任何丢失）进行监视。

（4）生理检测或记录：采用标准测量方法得到的记录，也许会有助于与用其他手段得到的

数据联系起来分析。例如，如果有了精子形态的记录，或是特殊寄生物的感染记录，遗传学家

就能因此寻找在不同群体中这些因素与变异水平的相关性。

1．2 组织样品的采集和保存

表7-1 列出了常用的组织在遗传学研究中的用途。下面详细给出针对不同研究目的的适当

方法。当然，每个实验室都有各自习惯的组织处理方法，因此，本文仅给出快速保存的有关

要求，但对每种组织的可用性都有所评述，以便在用途有冲突时，能对潜在数据的可能

62 遗传多样性研究的原理与方法

用作出迅速判断。

表7-l 各种组织材料在遗传学研究中的用途

注：表中数字代表正文中叙述的方法。数字“1”即代表正文7．1．2．1 中的方法，数字“2”即代表正文7．1．2．2

中的方法。其余依此类推。

使用肿瘤、毛发及精子样品，保存时应特别注意。使用细胞培养样品可减少对活体或新杀动

物的依赖，如果培养物来源于肿瘤组织细胞，则可大量减少对同种动物组织的进一步需求。组织

材料必须在数小时内送到有关实验室或用于其他的细胞培养。如果已经知道DNA 序列的一小部分，

就可利用PCR 技术从很少一部分组织中扩增DNA，从而使极其稀少的样品（如一根毛发或单个精

子）具有更高的利用价值和更大的可信度。

组织必须取自活体动物或死后1～2 分钟内的动物，并且要快速保存起来，除非出现下述情

况：在野外条件或是匆忙安排的活体取样，因此没有时间同实验室联系。此时要有目的地扩大采

集和储存量。如果已经详细知道样品的确切用途，则有时条件可以放宽。例如，对血液样品来说，

有些酶是不要求立即冻存的。

本来想看这篇文章 A general and flexible method for signal extraction from single-cell RNA-seq data

一种通用、灵活的单细胞转录组数据降维方法，ZINB-WaVE。它使用零膨胀负二项式模型，能够解释dropout、超表达和数据的自然属性，在稳定性和精确性上优于PCA和ZIFA。

对应的R包是 zinbwave

尝试了一下，发现hold不住，跳的太快不符合实际的进度，饭还是一口一口吃。

我的目标是经过 很长 一段时间的学习，能够真正把这种文章看明白，讲清楚。

两个月以前，我就开始零零散散收集一些单细胞的学习资料了。

看到Jimmy的文献分享，当时是头大的。

一时不知道如何着手，决定还是自己去试着搜一下最新的综述来看。

有点多，172篇（这是2019年的时候，现在翻了50倍不止）里挑了几篇顺眼的，从转录组入手。

这篇综述是 Single-cell RNA sequencing: Technical advancements and biological applications

随便挑的，瑞典的一个实验室。 （差不多就是翻译一遍啦）

简单回顾测序技术的发展，从桑格尔发明双脱氧末端终止法（一代测序）到人类基因组计划历时13年耗费30亿美元，测序一直很贵，直到高通量的边合成边测序技术（二代测序）出现。随着测序价格的不断下降，2009年开发出了第一个单细胞转录组测序方法（汤富酬）。

经过8年多时间的发展，如今不同的scRNA-seq流程有了大量改进，它们一般都分为四步：

1 单细胞（核）的分离和裂解

2 反转录

3 cDNA扩增

4 测序文库制备

除游离细胞外的细胞分离，有两条路线：

i 组织切片 - 激光捕获显微切割（ LCM ）或者 膜片钳（ Patch clamp ）

ii 酶法去除细胞间质 - 各种微操技术分选出单个细胞（各有优劣）

微吸（ Micro-pipetting ）适用于细胞量少或比较珍贵的样品，精准可见，通量低。

流式细胞分选（ FACS ）和微流控（ Microfluidic ）设备适用大量可用细胞，通量高。

· FACS同样用于筛选特定标记的某类细胞，它可能分出不止一个细胞和造成细胞损伤。

· 微流控更加温和，用于高度标准化的自动化流程，缺点是假定细胞损失和细胞大小偏好，目前的商用设备包括10X Genomics的Fluidigm C1系统和Illumina的Biorad SureCell系统（含ddSEQ细胞隔离器）。

微管平台（ Microwell platforms ）能够消除细胞大小偏好，也可以通过显微观察排除分出多个细胞的情况，商用设备有WaferGen的ICELL8单细胞系统。

多数单细胞收集方法都要求样品是完好的新鲜组织，因为微环境的改变影响正常细胞过程；酶促反应也可能使细胞产生应激，从而改变基因表达。有一个办法来避免这些问题，那就是只收集细胞核，细胞核包含未加工的mRNA和很少的mRNA。细胞核很黏，目前只有FACS能做到这一点。

大部分公开的流程都是使用oligodT引物，可以捕获到具有多聚结构的mRNA和少部分lncRNA。

SUPeR-seq 使用了混合oligodT和六碱基随机引物的方法，然而它没有去除rRNA却只检测到很少的rRNA，猜测是没有把二级结构打开。

MATQ-seq 最近被报道比Smart-seq2更灵敏，产量更高。它是基于 MALBAC 引物设计的，能做到全基因覆盖，检测总RNA。

反转录结束后，有多种策略合成第二条cDNA链

一种是SMART技术（switching mechanism at 5' end of RNA template）

这个系列包括 Smart-seq ， Smart-seq2 ， STRT ，利用转移酶和小鼠白血病病毒反转录酶来进行链置换并加上后续PCR扩增的接头。

PCR是常用的指数扩增技术，很容易因为GC含量的差异造成扩增偏倚。

另一种就利用了体外转录的方式（IVT）进行线性扩增

这个系列包括 CEL-seq ， MARS-seq ， CEL-seq2 ，通过将T7启动子连在oligodT引物上，可以在cDNA合成后启动IVT。IVT取消了对模板置换的需求。

另外， MALBAC-RNA 使用准线性扩增，它的引物能生成末端互补的扩增子，形成闭环来防止指数复制。

不同的技术流程按照cDNA覆盖大致可以分为两类：全长（full-length）和基于标签（tag-based）。

全长的方法 试图得到基因体均匀读长覆盖并增加匹配序列数，更适合亚型发现、剪切事件、SNP鉴定等等分析。一大缺陷是建库通量较低，难以混样测序。更重要的是，它不能结合UMIs（unique molecule identifiers）来进行数字量化。有一个例外， MATQ-seq 可以把barcodes和UMIs整合到MALBAC引物上，从而克服这个缺陷。

基于标签的方法 可以继续细分成5'还是3'，主要优点是能结合UMIs，可以混合多个样品，允许基因水平的定量优化。因为读长被限制在序列一端，相对而言灵敏度较低，大部分仅用于基因表达定量。

选择什么方法取决于要回答的生物学问题。如果是发现细胞类型和鉴别组织成分，两种方法都可以。基于标签的方法可以在反转录之后把所有样品混在一起，价格更便宜规模可以更大。如果是等位基因表达、不同亚型的发现，全长的方法更加合适。这些方法中， Smart-seq2 在灵敏度和产量上都表现出众，不过要用到Tn5，比较贵，如果有很多很多的细胞要测，比如4000个，那么 Drop-seq 也是很好的选择。

关于灵敏度，需要考虑测序深度。这些方法都有一个共同点，当一个样品测到1M reads之后，灵敏度开始变得比较稳定，从1M reads 测到 45M reads，灵敏度只略微提升。

需要多少细胞的数据用来分析，取决于细胞类型的罕见程度。

Nicholas E Navin提供了一个计算公式 P(d) =1-(1-s)^n

如果感兴趣的细胞亚型占比约为1%，需要测250个细胞使检出能力达到09，需要测500个细胞使检出能力达到10。另外也需要做重复实验来评估假阳性率和假阴性率。

需要的细胞数和必要的测序深度同样依赖于感兴趣的细胞与其他细胞的差异程度，如果这种细胞有非常独特的转录特征，那么测的细胞数少一点，测序深度浅一点也是可以的。

SingleCell的问题：细胞与细胞之间有很强的异质性。

只有一个细胞，初始数据量就小，噪音就大。

RNA捕获效率不稳定，文库制备的随机丢失会制造技术噪音。

随机基因表达，不同的细胞状态细胞大小细胞周期会产生生物噪音。

批次效应使高通量的实验数据存在系统误差。

认真规划实验步骤，作多次生物学重复可以降低批次效应，然而生物样品的遗传背景是很难通过实验步骤来控制的。

鉴定批次效应的一个办法是通过主成分分析（PCA），看细胞是否会按照相应的起源进行分群。

为了解释技术操作带来的误差，通常加入外源的RNA进行质控。不同浓度、长度、GC含量的合成RNA可以起到监控作用。

但是外源样品与内源RNA的分子特征并不会完全相同，对照作用有限。

怎么减少RNA损失，使信息能够保真是scRNA-seq的关键性挑战，测序结果仍需要谨慎对待，推荐做功能性验证。

过去几年，scRNA-seq已被应用于 发现新的细胞类型 ， 探索动态发育过程 ， 鉴定基因调控机制 ， 揭示随机等位基因表达 。

这篇综述只着重介绍了胚胎植入前发育和大脑皮层，在这两个方向上scRNA-seq有了巨大的概念性发展。

生命起源于一个受精卵，受精卵的分化过程受转录水平调控形成三个主要的细胞谱系。这个过程里有几个长期存在的问题：1 单个卵裂球之间是何时出现差异的？2 三个细胞谱系如何及时分离？3 胚胎基因组是何时激活的？4 早期的规范化事件是否存在物种间差异？

scRNA-seq为这些问题的解答提供了新的思路。早先对小鼠胚胎的早期卵裂球进行实验操作（包括增、减单个细胞），都不会影响到胚胎发育，表明早期卵裂球会经历一个调节发育（受到感应信号可以变成任何细胞类型）。然而scRNA-seq的结果显示，早在四分体时期，卵裂球间已经存在分子不对称了。后来通过比较滋养外胚层（TE）和内细胞团（ICM）的细胞命运，鉴定出Sox21基因在四分体时期存在稳定的异质表达，并且影响后代细胞的分化路线。在植入前发育的各个阶段，通过scRNA-seq可以得到一个全过程的基因动态表达视图，跨物种数据比较发现人和小鼠的胚胎发育存在很多的生物学差异，如胚胎基因激活时间，细胞谱系建立时期，等位基因特异性表达情况等等。对人类胚胎细胞进行具体的功能研究比较困难，后面换成了相近的猕猴细胞。

在神经系统科学领域，对所有哺乳动物的神经细胞进行系统性分类是一个长期的目标。理解大脑的细胞构成有助于破译它的功能和连接性。不同的研究表明，对来自小鼠大脑不同区域的细胞做scRNA-seq，进行细胞分群，发现中间神经元具有更大的异质性，暗示中间神经元细胞具备更加复杂多样的功能。通过基因表达谱得到的细胞类型分类是否显著关联不同的功能性质还有待进一步的研究，这些实验的方法都显示有一定的偏好性。

为了让基因表达直接关联解剖、形态、功能的属性，两个实验室同时开发出了 Patch-seq ，这个技术把全细胞电生理膜片钳记录与scRNA-seq相结合。

其中一个实验室结合膜片钳和Smart-seq2，在新皮质L1外层分析了58个皮层细胞，这项研究首次使用了机器学习以不同的放电模式来进行细胞形态分类，结果跟来自基因表达谱的分群结果对应的很好。58个细胞分出两种细胞亚型，eNGCs和SBCs，重要的是，发现SBCs富集了四个神经精神病相关的基因。

另一项研究使用膜片钳和STRT-seq，在躯体感觉皮质的1/2层分析了45个中间神经元和38个椎体神经元细胞，根据电生理性质和形态，分为5个亚型和3个亚型。这八个亚型跟scRNA-seq鉴定到的分群结果相吻合，从而确认了Patch-seq方法的有效性。

Patch-seq的分析适用于离子通道和受体基因研究，可以预测神经生理学表型。跟鲜活细胞的scRNA-seq相比，Patch-seq捕获到的基因显然更少，通量相对更低，然而正因为有不同的单细胞测序方法，使得从单细胞尺度上深入分析分子特征、形态和异常复杂组织的功能成为可能。

单分子原位荧光杂交技术（ smFISH ）在2008年被开发出来，用作单细胞尺度的组织RNA定量，它使用带荧光基团的20bp核酸探针。这项技术最初高度受限于能够同时检测到的转录本数量，后来引入分组探针文库的组合标签克服了这一缺陷。随着七种光转换染料和空间条码结合超分辨显微技术的使用，能够同时检测到的基因数进一步增加。高分辨率的显微镜能够识别结合了同一种探针实际序列不同的mRNA。接着，通过使用顺序轮的杂交、成像、探针剥离来给mRNA加条码，继续优化了该方法。smFISH的一大优势是杂交效率很高，能够检测到95%的mRNA。smFISH适用于剪切变异、染色体位点以及SNP。类似的，荧光原位RNA测序（ FISSEQ ）也使用基因特异的探针来读取空间基因表达。跟smFISH明显不同的是，FISSEQ的reads比RNA-seq还少很多，丰度不够。总体上看，以上这些原位荧光的方法想要覆盖整个转录组，都比较费时费力。

使用 LCM 的单细胞空间转录组方法已经被开发出来了。LCM可以从速冻组织切片中仔细分离出单个细胞，分辨率能达到亚细胞水平。LCM适用于任何胚胎和成熟时期，特别是那些难以分离的组织。通过简单的组织染色或者快速的抗体染色可以鉴定出感兴趣的细胞。LCM最初是与全转录组基因芯片结合，然后是RNA-seq，直到现在，需要的细胞数也是数百上千。结合scRNA-seq和LCM的 LCM-seq ，通过直接裂解分离的细胞，消除通常是在LCM之后的RNA隔离步骤，可以简化流程，降低技术噪音，减少费用。同时每个细胞的空间信息都保留了下来并且不需要组织分离步骤，从而能够在单细胞水平同时研究细胞异质性和空间差异。保留空间信息的重要性不应该被低估它可能是组织内细胞识别的关键性因素。此外，因为细胞在分离前保留了原有位置的连接信息，比起需要进行组织裂解的测序方法，更能够反映生物体内的真实情况。LCM-seq另一个优势是可以用于缺损和部分退化的组织。然而，至今为止的一大缺陷是RNA有一些片段化，即使处理的时间很短也一样，所以覆盖度比起鲜活细胞要低，不能作RNA剪切的深入分析。LCM染色的后续优化有可能克服这一障碍。

一种叫作”空间转录组（ spatial transcriptomics ）“的优雅方法近期被开发出来，能够不分离细胞直接使用完整的组织切片进行转录组分析。组织切片被放置在slide上，使用含有独特空间条码标记的反转录引物。 slide上布满直径100微米间隔200微米的孔，孔内有接近两亿个寡核苷酸探针。组织经过通透性处理后加上反转录试剂，组织最终会被酶解，留下cDNA与slide上排列的探针结合。这种方法的分辨率很高，100微米，对于整体空间信息的接收在时间上非常高效。但是不容易显示出细胞的异质性，因为细胞大小的差异，这种方法只能展示出特定二维坐标下单一或多个图层的空间信息。

测序技术目前已经能够从同一个细胞中获取基因组、表观组、转录组和蛋白组的情况。因此，可以整合每个细胞的DNA、RNA、蛋白还有表观修饰的信息得到一个综合的理解。为了这个目的开发的方法有：DR-seq和G&T-seq，同时分析基因组和转录组；scTrio-seq，基因组、转录组和甲基化谱；scM&T-seq，转录组和甲基化谱；PEA-qPCR，蛋白和一个基因panel。同时研究基因组和转录组可以在基因表达水平关联CNV、染色体融合和调控因子的SNV。还可以揭示克隆结构和细胞亚型，直接联系基因型和表型。另一方面，结合转录组和甲基化分析，可以知道单细胞中基因组不同功能因子的DNA甲基化水平与基因表达水平的关系。未来把总RNA，小RNA，染色体重组和高级结构结合到单细胞多组学里，可以更加详细的描述正常细胞功能和疾病过程。

另一个新兴的前沿研究是结合系统基因功能分析和scRNA-seq分析。

2016年一群世界领先的科学家开启了人类细胞图谱计划（ Human Cell Atlas ），目前已经包括了免疫系统、中枢神经系统、上皮组织、胚胎细胞和癌症。这个计划将会提供一个囊括了细胞类型、标记基因、信号通路和调控机制的综合参考视图，给不同个体和疾病的组织带来更好的生物靶标识别和药物标靶，从而进一步发展精准医学。

scRNA-seq的数据已经表明，在大脑不同区域和不同的组织，细胞间的异质性比之前预计的还要大。面前更艰巨的任务是从功能上评估RNA成分的异质性具体在何种程度上影响了相关细胞表现出不同的功能。大部分的scRNA-seq研究对此有所描述，仍未清楚的是，多大程度的转录组差异会导致细胞功能的区别，使细胞成为不同的类型而不是同类型细胞的不同可选状态。某（几）种转录本的表达量积累到什么水平能够看到明显的细胞功能改变？这取决于该基因的功能以及其他的基因表达，还取决于特定转录本的稳定性和半衰期。不经过功能测试就将功能与转录水平关联起来不是一个简单的任务。无论如何，细胞和分子生物、生物化学、生理学以及数学模型的结合，将来肯定能够解答革命性的scRNA-seq技术还不能回答的问题。单细胞技术在未来的生物功能注释中将会是不可或缺的工具。

这篇综述没有提到具体的数据分析。

转自 单细胞入门-读一篇scRNA-seq综述

答案：A、B、C

启动子的基本结构

启动子是一段位于结构基因5'端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。因为基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物，故RNA聚合酶如何有效地找到启动子并与之相结合是转录起始过程中首先要解决的问题。有实验表明，对许多启动子来说，RNA聚合酶与之相结合的速率至少比布朗运动中的随机碰撞高100倍。

转录的起始是基因表达的关键阶段，而这一阶段的重要问题是RNA聚合酶与启动子的相互作用：启动子的结构影响了它与RNA聚合酶的亲和力，从而影响了基因表达的水平。

为什么RNA聚合酶能够仅在启动子处结合呢显然启动子处的核苷酸顺序具有特异的形状以便与RNA聚合酶结合，就好像酶与其底物的构相恰恰适合一样。将100个以上启动子的顺序进行了比较，发现在RNA合成开始位点的上游大约10bp和35bp处有两个共同的顺序，称为-10和-35序列。这两个序列的共同顺序如下，-35区“TTGACA”，-10区“TATAAT”。大多数启动子均有共同顺序（consensus sequence)，只有少数几个核苷酸的差别。

转录单元

转录单元（transcription unit) 是一段从启动子开始至终止子（terminator）结束的DNA序列，RNA聚合酶从转录起点开始沿着模板前进，直到终止子为止，转录出一条RNA链。在细胞中，一个转录单元可以是一个基因，也可以是几个基因。

转录起点

转录起点是指与新生RNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基，研究证实通常为一个嘌呤。常把起点前面，即5’末端的序列称为上游（upstream），而把其后而即3’末端的序列称为下游（downstream）。在描述碱基的位置时，一般用数字表示，起点为+1，下游方向依次为+2、+3……，上游方向依次为-1、-2、-3……。

启动子区

启动子区是RNA聚合酶的结合区，其结构直接关系到转录的效率。关于其结构特点，Pribnow设计了一个实验，他把RNA聚合酶全酶与模板DNA结合后，用DNase l水解DNA，然后用酚抽提，沉淀纯化DNA后得到一个被RNA聚合酶保护的DNA片段，约有41～44个核苷酸对。他先后分离了fd噬菌体、T7噬菌体的A2及A3启动子、h噬σ菌体的PR启动子及大肠杆菌乳糖操纵子的UV5启动子等5段被酶保护的区域，并进行了序列分析，以后又有人做了50多个启动子的序列分析后发现，在被保护区内有一个由5个核苷酸组成的共同序列，是RNA聚合酶的紧密结合点，称为Pribnow区（Pribnow box），这个区的中央大约位于起点上游10bp处，所以又称为-10区。

许多原核生物都含有这两个重要的启动子区：RNA聚合酶同启动子结合的区域称为启动子区。将各种原核基因同RNA聚合酶全酶结合后，用DNase I水解DNA，最后得到与RNA聚合酶结合而未被水解的DNA片段，这些片段有一个由5个核苷酸（TATAA）组成的共同序列，以其发现者的名字命名为Pribnow框(Pribnow box），这个框的中央位于起点上游10bp处，所以又称-10序列（-10 sequence），后来在-35 bp处又找到另一个共同序列（TTGACA）。Hogness等在真核基因中又发现了类似Pribnow框的共同序列，即位于-25～-30 bp处的TATAAAAG，也称TATA框（TATA box）。TATA框上游的保守序列称为上游启动子元件(upstream promoter element，UPE）或上游激活序列(uptream activating sequence，UAS）。另外在-70～-78 bp处还有一段共同序列CCAAT，称为CAAT框（CAAT box）。

在真核生物基因中，Hogness等先在珠蛋白基因中发现了类似Pribrow区的Hogness区（Hogness box），这是位于转录起始点上游-25~-30 bp处的共同序列似TAAA，也称为TATA区。另外，在起始位点上游-70～-78 bp处还育另一段共同序列CCAAT，这是与原核生物中-35bp区相对应的序列．称为CAAT区（CAAT box）。

-10位区和-35位区

提纯被保护的片段后却发现，RNA聚合酶并不能重新结合或并不能选择正确的起始点，表明在保护区外可能还存在与RNA聚合酶对启动子的识别有关的序列。果然，科学家不久就从噬菌体的左、右启动子PL及PR和SY40启动子的-35 bp附近找到了另一段共同序列：TTGACA。经过数年的努力，分析了46个大肠杆菌启动子的序列以后．确证绝大部分启动子都存在这两段共同序列，即位于-10bp处（……T89A89T50A65A100……）的TATA区和-35 bp处（……T85T83G81A61C69A52……）的TTGACA区。现已查明，-10位的TATA区和-35位的TTGACA区是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与σ因子相互识别而具有很高的亲和力。

原核生物中-10区同-35区之间核苷酸数目的变动会影响基因转录活性的高低，强启动子一般为17±1 bp，当间距小于15 bp或大于20 bp时都会降低启动子的活性。

以下是核苷出现的概率： [3] 

核苷出现的概率表格

在真核基因中，有少数基因没有TATA框。没有TATA框的真核基因启动子序列中，有的富集GC，即有GC框；有的则没有GC框。GC框位于-80～-110bp处的GCCACACCC或GGGCGGG序列。

TATA框的主要作用是使转录精确地起始；CAAT框和GC框则主要是控制转录起始的频率，特别是CAAT框对转录起始频率的作用更大。如在TATA框同相邻的UPE之间插入核苷酸，也会影响转录使之减弱。

-10序列（原核生物）也称为Pribnow box，在真核生物中相应的序列称为TATA盒，又称为Goldberg-Hogness box，是RNA聚合酶Ⅱ的结合部位。-10和-35这两个部位都很重要：1RNA聚合酶能和-35和-10序列中的碱基和DNA主链中的磷酸基相接触；2离开共同顺序较远的启动子的活性亦较弱；3最重要的是，破坏启动子功能的突变中有75%都是改变了共同顺序中的碱基，其余25%亦为离共同顺序较近的。-35和-10序列相距约20bp，即大致是双螺旋绕两圈的长度。因为这两个结合区是在DNA分子的同一侧面，可见此酶是结合在双螺旋的一面。可以想像，它能"感觉到每个结合区的沟底中碱基所产生的特异形状。"

原核生物亦有少数启动子缺乏这两个序列（-35和-10）之一。在这种情况下，RNA聚合酶往往不能单独识别这种启动子，而需要有辅助蛋白质的帮助。可能是这些蛋白质因子与邻近序列的反应可以弥补启动子的这个缺陷。

在真核生物中，在转录起始位点上游70-80bp处有CAAT顺序，也称为CAAT盒。这一顺序也是比较保守的共同顺序：GCCTCAATCT。RNA聚合酶Ⅱ可以识别一顺序。在对家兔β珠蛋白基因CAAT顺序的研究中发现，用人工方法诱导CAAT顺序发生突变使家兔β珠蛋白基因的转录水平降低。

启动子中的－10和-35序列是RNA聚合酶所结合和作用必需的顺序。但是附近其他DNA顺序也能影响启动子的功能。例如，在核糖体RNA合成的起始位点的上游50到150核苷酸之间的顺序就是对启动子的完全活性所必需的。如果这一段DNA顺序缺失并由其他外来DNA所取代（例如克隆在质粒DNA中的rRNA基因），则转录起始的频率将降低10倍。同样，在其他情况下，远隔部位的富有AT的DNA顺序被认为能增进转录起始的频率。有时候上游顺序可以是某些能直接激活RNA聚合酶的"激活蛋白"的结合部位。但是，上游顺序往往有另外的功能。例如上游顺序可以吸引拓扑异构酶，后者可导致结合的局部产生有利于转录起始的超螺旋状态。上游顺序所引起的DNA结构的微细变化可能在双螺旋上被传导到相当远的距离，因此上游顺序的变化可以影响到-10和-35区的DNA结构细节。

情侣表白套路文案

1“我觉得你像一本书”

“因为我想念你”

2“真希望你没见过什么大世面”

“一生只爱我这张脸”

3“什么都可以错”

“别再错过我”

4“其实我最爱的数字你知道是什么吗？”

“是359”

“你念一下上句话的第3、5、9个字”

5“我刚摸了摸胸口，心脏突然噗哒噗哒地跳”

“你知道为什么吗？”

“因为遇见心动的人了”

6“你知道幸福的秘密吗？”

“那就是拥有我喽”

7“我感觉我的眼光是世界上最好的”

“因为我看上你了”

8“我想请个假”“请什么假？”

“我想请你嫁给我”

在数字化的今天，视频是人们交流和传递信息的一种重要方式。然而，对于需要从视频中提取文字、字幕等内容的人来说，这一过程往往是非常困难和耗时的。

 以下五种方法，解决提取视频文案难题：

方法一：使用视频文案提取器

视频文案提取器能够快速、方便地提取视频中的文案并将其转换为可编辑的文本格式。利用这个工具能够省去手动逐个查找文案的麻烦，让你更加高效地处理视频中的文案。

操作步骤：

1、 首先就需要将视频的链接复制下来。比如我们在某音平台上有个视频很适合作为素材，找到视频右下角的分享键，就会弹出窗口，可以看到复制视频链接的按钮，点击即可复制视频链接。

2、 接下来，我们可以选择一个可以帮助我们快速提取短视频文案的工具，选择一个好用的工具是比较重要的。实例如图，点开小程序，即可看见”热门视频工具“中第一个就是”视频提取工具“，点开将刚才复制的视频链接粘贴到如图所示空白处，点击”开始提取文案“即可快速获得提取出的视频文案内容。

3、 最后就只需要将文案复制到自己需要的地方就可以了。小程序显示出视频文案后，你可以直接复制结果内容，也可以稍后在“文案获取历史记录中“查看，注册登陆马力文案提取器后，在”我的“>”文案历史“中也可以随时调取转换过的视频文案。

这个文案提取器操作简单，文字提取速度快，用户界面友好，比较省时省力。

方法二：使用Otterai

Otterai是一款视频文案提取工具，它可以在短时间内快速提取视频文案，并自动根据文本生成一个剪影版的视频。使用步骤如下：

1、 注册并登录Otterai账号。

2、 上传你需要提取文案的视频。

3、 点击“Transcribe”按钮，Otterai将开始提取视频文本。

4、 提取完成后，你可以编辑和下载视频文本，根据需要生成剪影版视频。

优点：支持多种文件格式，可多语言转录

缺点：准确率会受到背景噪音等外在因素的影响而下降，付费版价格较高

方法三：使用HappyScribe

HappyScribe是另一款视频文案提取工具，它支持多种语言和多个视频格式，提取的文本精准度也比较高。使用步骤如下：

1、 注册并登录HappyScribe账号。

2、 上传你所需提取文案的视频。

3、 HappyScribe将开始为你自动提取视频文本。

4、 在提取完成后，你可以编辑并下载视频文本，会自动添加时间轴信息，帮你更方便地进行后续操作。

优点：提供了快捷编辑和分享文本功能，方便用户使用

缺点：免费版功能有限，可能会出现一些格式错误或者没有完全识别文本的情况，这需要人工检查或者修改。

方法四：将视频转化为音频，使用Adobe Pr Pro语音转文本的功能

1、 下载并安装Pr Pro

2、 单击窗口>文本

3、 在转录文本选项卡中，单击创建转录文本，然后选择转录文本选项。

音频分析：使用“基本声音”面板选择标记为对话的音频剪辑以进行转录，或从特定音轨中选择音频并转录。

语言：选择视频中的语言。

下载语言包：可根据需要安装其他语言包。

仅转录从入点到出点：如果已标记入点和出点，则可以指定Pr Pro转录该范围内的音频。

将输出与现有转录合并：在特定入点和出点之间进行转录时，您可以将自动转录文本插入到现有文本中。选择此选项可在现有转录文本和新转录文本之间建立连续性。

在有多个说话者时选择启用识别：如果您的序列或视频中有多个说话者，请选择此选项。

4、 点击转录。

Pr Pro开始转录过程并在转录文本选项卡中显示结果。过程中可编辑转录中的说话者，查找和替换转录中的文本。

优点：可以通过调整音频渲染和混合等设置，提高语音转文本的准确率。

缺点：在软件中进行语音转文本的工作可能会影响软件的运行速度；使用该功能需要花费额外的费用。

方法五：百度语音识别

使用百度语音识别可登录百度AI开放平台，实现短语音识别、实时语音识别、音频文件转写等功能，可按时间、次数计费。

优点：可以进行离线识别和在线识别，离线识别不需要联网，方便使用。

缺点：在离线识别模式下，需要在本地下载并安装较大的语音识别模型，占用一定的存储空间。

总之，这些视频文案提取工具都有各自的特点和使用方法，大家可以根据自己的需求选择最适合自己的工具。对于那些需要频繁进行视频文本提取的用户而言，使用这些工具可以帮助你提高工作效率，更好地进行视频编辑和制作。

RNA介绍

核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic

Acid），存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A（腺嘌呤）、G（鸟嘌呤）、C（胞嘧啶）、U（尿嘧啶），其中，U（尿嘧啶）取代了DN的T（胸腺嘧啶）。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。

RNA提取（TRlzol提取法）

1．取样，研磨（组织）： 迅速取出组织样本，在电子天平中称重约03-05 g（也可根据实际经验估测取样量），放入液氮预冷的研钵中，边研磨边加液氮，整个过程都不要使组织融化。

2．裂解：

（1）组织：按每100

mg组织加入1 mL TRIzol，继续研磨至较细粉末，将组织裂解液转移到15 mL 离心管中，每管约1 mL，室温放置15min以上；也可直接将研磨的较细粉末用枪头刮入已取好的含有1 mL TRIzol的15 mL 离心管中，4℃放置10 min，或室温放置15min以上；

（2）细胞：（悬浮细胞需预处理：4℃，3000

rpm，离心10 min，收集细胞沉淀于15 mL 离心管底）；弃去培养液，加入适量1xPBS洗一次，弃去1xPBS，加入1 mL

TRIzol试剂（TRIzol加入量基于细胞数（1 mL/ 05-1x107个）或培养瓶的面积（1 mL/10 cm2），用移液器轻吹打几次，超净台中室温放置15 min以上，转移1 mL 液体到15 mL 离心管中。

（3）若不马上进行提取，可放入－80℃冰箱中冻存。

3．抽提： 按02 mL 氯仿/ 1 mL TRIzol的比例加入氯仿，vortex 30 sec或用手剧烈摇动15 sec，室温放置2-3 min后， 4℃，12000 rpm，离心15 min；小心转移上清到一新的15 mL 离心管中，不要吸取中间层。

4．沉淀： 按异丙醇/上清=1:1的比例加入异丙醇，上下颠倒混匀，-20℃放置30 min后，4℃，12000 rpm 离心15 min。弃上清，异丙醇不要回流过多，可再短暂离心，用移液器将剩余的异丙醇吸出。

5．漂洗： 加入1 mL 75％乙醇，用手指将沉淀块弹起，上下颠倒几次，4℃，12000 rpm 离心5 min。弃上清，75％乙醇不要回流过多，可再短暂离心，用移液器将剩余的75％乙醇吸出。

6 风干，溶解： 超净台中自然干燥 5-10 min，不要真空离心干燥， RNA不要完全干透，以防不能完全溶解；用DEPC水溶解RNA，60-65℃助溶 5-10 min。

7 定量： 进行Total RNA定量，如果不马上定量，将样品贮存于-80℃。

RNA定量

我们一般通过Nanodrop紫外分光光度计测定RNA样本在260nm处的吸光值来计算RNA含量。但是，DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，其性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。所以紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。

Nanodrop紫外分光光度计可以得到以下参数：

OD230 ：杂质（酚、糖原等碳水化合物）的吸光度；

OD260 ：核酸的吸光度；

OD280 ：蛋白质的吸光度；

OD260 /280 ：纯的RNA比值在15 ~21之间，如果比值低，表示受到蛋白质的污染；

OD260 /230 ：纯的RNA比值在20 ~25之间，如果比值低，表示受到有机物如糖、肽、苯酚等的污染。

RNA完整性鉴定

我们一般使用电泳、Agilent2100等仪器来鉴定RNA的完整

RIN值

RIN（RNA integrity number）代表RNA完整性的数值，对total RNA的完整性进行数字化的评估，范围在1 ~10，数值越接近10表明样品完整性越高，反之完整性越差，如下图所示。

RNA降解程度对各个测序项目的影响

① 转录组测序： 降解程度会影响5’ 端的数据质量；

② micRNA测序： 由于本身的片段较小，受降解的影响较小；

③ 降解组测序： 若受到外源降解，回复给内源性降解，受影响较大；

④ lncRNA和circRNA测序： rRNA去除方式建库，样本降解影响小。

原核污染对各个测序项目的影响

① 转录组测序： 一般不影响数据，轻微污染时可无视，污染较严重时需增加建库起始量；

②micRNA测序： 对数据影响较小，一般是按污染比例对数据的比对率和有效数据量产生影响，轻微污染时可无视，污染比例较高时需加测数据量；

③ 降解组： 情况同转录组；

④ lncRNA和circRNA测序： 影响极大，建库方式决定了如果污染，若不给予处理，数据可能完全没法用，故对该问题需要高度警戒。

常见问题分析

得率低：

① 样品裂解或匀浆处理不彻底；

② RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<165（RIN<7）：

 ①检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高；

 ②样品匀浆时加的试剂量太少；

 ③ 匀浆样品时未在室温放置5分钟；

 ④ 吸取水相时混入了有机相；

 ⑤ RNA沉淀未完全溶解。

   RNA降解：

  ①组织取出后没有马上处理或冷冻；

  ②待提取RNA的样品保存在了-5至-20℃；

  ③细胞在用胰酶处理时过度；

  ④溶液或离心管未经RNase去除处理；

  ⑤电泳时使用的甲醛pH值低于了35。

DNA污染：

①样品匀浆时加的试剂量太少；

②样品中含有有机溶剂(如乙醇，DMSO等)，强缓冲液或碱性溶液蛋白聚糖和多糖污染：沉淀RNA的过程中作以下改进可去除这些污染，步骤7中，每使用1mlTRIzol在水相中加025ml异丙醇和025ml高盐溶液(08M柠檬酸钠和12MNaCl)混合离心，按之前操作进行。这种方法可使蛋白聚糖和多糖留在溶液中，高效沉淀出纯RNA。从含有大量多糖的植物中提取RNA时应在匀浆后离心，并加上以上操作步骤。

关于百奥益康

北京百奥益康医药科技有限公司（以下简称“百奥益康”）是天津百奥医药科技有限公司的全资子公司，公司由资深的单细胞高通量测序技术科学家团队创立，致力于打造中国先进的肿瘤单细胞诊疗品牌，为科研和临床提供单细胞诊断仪器、诊断试剂、医学诊断技术分析等全套解决方案，高效赋能肿瘤个体化诊疗。

百奥益康是国内为数不多实现“研发+市场”自主大幅增长的落地团队。公司管理团队、技术团队和营销团队有丰富的单细胞领域服务和研发经验，曾成功领导打造了国内领先的单细胞科研服务团队，与10x Genomics、BD、MissionBio等国际领先的单细胞平台公司有深入合作，对单细胞检测相关技术、产品、应用有深厚积淀。依托配置合理、经验丰富的科学家团队，百奥益康实现了单细胞测序技术创新发展，能更加快捷、稳定地完成从样本处理、高通量单细胞分离、测序文库构建，到数据分析和临床意义挖掘等单细胞关键技术流程，提供涵盖单细胞诊断仪器、诊断试剂、医学诊断技术分析等在内的完整技术解决方案。 

主营业务

百奥益康科研服务以单细胞服务为主体，配以其他以高通量测序和芯片为基础的多组学服务，提供一站式的科研服务，从而实现从单细胞水平到bulk水平系统完整的解决方案。

马上又到了虐哭单身狗的520情人节了，各位小仙女想好怎么跟自己对象表白了吗不知道怎么表白的小仙女可以看看我准备浪漫不俗的表白情话哦!下面是我分享的520情人节文案表白老公的话，欢迎大家阅读。

520发朋友圈的精美句子

1 人生就是连续剧，而你就是我的幸福情节，是我快乐剧本的女主角，充当甜蜜角色，请你倾情浪漫演出，说着幸福的台词，奉献幸福的镜头，20我爱你，愿一生有你!

2 爱你没有时间限制，一年三百六十五天;爱你没有地域边限，天涯海角爱你永远;爱你不需要隐瞒，我要让所有的人看见我们爱情的甜蜜。520我爱你，让我们的爱天长地久。

3 愿爱如阳光灿烂，温暖你心;愿爱如月光浪漫，凌乱你心;愿爱化作相思雨，模糊你眼;愿爱如清风拂面，轻抚你发;520愿爱永恒，让我爱你到天荒，到地老，永远不分离。

4 真心一路小跑，跟随心灵的步调，追踪幸福小脚，浪漫四面来袭，温柔八方报到，20我爱你，一颗真心请你瞧，爱你一生就是要你知道!

5 幸福路上有你伴，快乐生活有你陪，困难时刻有你随，甜蜜时刻有你给。520，我爱你，爱你永远不分离，只愿你快乐无忧，健康平安!

6

7 "手握相思笔，独坐相思椅，望着相思月，想着相思的你，我默默的等待，却无法喊出对你的关爱，只能用岁月的剪刀把思念裁剪，一点点揉碎放进这条短信里!"

8 日日孤单因思你，夜夜寂寞因想你，时时伤心因无你。刻刻难过因恋你。害我整天迷着你，只因全心爱着你。520我爱你，全心全意爱着你!

9 没有雨，春天毫无生气;没有光，夜晚黑黑漆漆;没有花，夏日如此低迷;没有你，日子十分没趣。520，我爱你，对你的爱无人能比，牵你的手，永远一起。

10 又是一年520，浪漫春风解风情，你我两心如月明，夜夜逐潮思念行，爱你不论远和近，想你哪管阴或晴，天地亘古最难静，时空变幻终不定，有你就有好风景，有你就有多温情。520我爱你，祝愿你我爱情永远甜蜜，一生一世永不分离!

11 爱情只花为你盛开，绽放着朵朵柔情，陪你走过一生的浮华，真情之树为你茂盛，浓郁着片片深情，伴你走过一世的喧嚣，520我爱你，爱你一辈子，愿携你手到白头，给你一生一世的幸福甜蜜!

12 没有你，“一分钟太长”;和你在一起，“一百年太短”。因为有你，烦恼全消，因为有你，幸福甜蜜。520我爱你，不求曾经拥有，只愿天长地久生!

13 我的柔情似水，永远把你包围;我的浓情如醇，永远把你情困;你的笑靥如花，让我幸福到家;你的笑声如磬，让我痴迷心动。520，我爱你，爱你今生不分离，甜甜蜜蜜长相依!

14 爱是幸福的伊甸园，充溢着快乐，洋溢着温暖;真情不可来猜拳，不可猜测，不可埋怨;520我爱你日，请宣告你的爱情宣言，祝完美的爱情今日成全。

15 没有鲜花钻戒，有的只是一份情真意切;没有甜言蜜语，有的只是终生相诺相许;没有汽车别墅，有的只是爱你义无反顾。520，宝贝，我爱你!

16 幸福路上有你伴，快乐生活有你陪，困难时刻有你随，甜蜜时刻有你给。5月20日我爱你，爱你永远不分离，只愿你快乐无忧，健康平安!

17 20我爱你，传递信息出奇迹，爱情际遇会找你，美女冲你笑眯眯，一见钟情爱上你，令你幸福又甜蜜，快乐从此不分离，今年新郎就有你。

520表白文案

1、我是你闲坐窗前的那棵橡树，我是你初次流泪时手中的书，我是你春夜注视的那段蜡烛，我是你秋天穿上的楚楚衣物……爱情存在于奉献的欲望之中，并把情人的快乐视作自己的快乐。520，我爱你!

2、 520我爱你，只想告诉你，我永远守候你的美丽;只想告诉你，没有谁可以替代你;只想告诉你，你是我今生的唯一;只想告诉你，爱你全心全意。

3、真爱痴情，就是当感觉、热情和浪漫统统拿掉之后，仍然珍惜对方。我爱你赤裸裸的真心，爱你不是两三天，520我爱你，真爱此生不渝，痴情永永远远!

4、酒般的思念，一饮就醉，醉时就用全部的热情读这忧伤的月色。于是，月醉了，夜醉了，我也醉了。520，我爱你!

5、世上最凄绝的距离是两个人本来距离很远，互不相识，忽然有一天，他们相识，相爱，距离变得很近。520，我爱你!

6、 520，祝你快乐!你的过去我来不及参与，你的未来我不会再错过!真诚之中，与你相识相知;灵犀之间，与你朝夕相伴。

7、遇见你，是一种缘分;爱上你，是一种幸福;想念你，是一种习惯;珍惜你，是一种永恒;祝福你，是一种必然。情人节快乐。

8、不管经过多长时间，你永远都是我的太阳。我是月亮没错，但是如果没有你的存在，我只是一颗阴暗的星球。520，我爱你!

9、 520又名我爱你!有了太阳地球才回转，有了地球月亮才回转，有了月亮星光才如此灿烂，有了你我的世界才如此丰富浪漫。

10、为什么我会如此痴情，为什么我会情不自禁，为什么我会忘乎所以520，我爱你!

11、谁的爱情宫殿是用美德奠基，用财富筑墙，用美丽发光，用荣耀铺顶，谁就是最幸福的人。520，我爱你!

12、爱上你，是我真心;拥有你，快乐开心，;呵护你，事事顺心;祝福你，永远舒心;520，我爱你，爱你一生我心愿，护你一生我情愿。

13、暖暖的阳光照耀你，柔柔的清风抚摸你，阵阵的细雨呼唤你，静静的夜里在想你，情人节来临，送你吉祥如意，愿你笑口常开。

14、我爱你，给我生命的父母;我爱你，给我指引方向的启蒙老师;我爱你，风雨同行的朋友;我爱你，伴我左右的妻子;520我爱你日，发条短信给他，大声说出你的爱。

15、如果，世间真有一见钟情，我想我碰到了。没有任何的原因，就这样突兀的闯入了我的心里，那是心跳扭捏语无伦次，那是一种充满阳光的甜蜜。520，我爱你!

16、你的名字就那么几笔，却深深刻进我心底。

17、当两人之间有真爱情的时候，是不会考虑到年龄的问题，经济的条件，相貌的美丑，个子的高矮，等等外在的无关紧要的因素的。520，我爱你!

18、当我们满怀喜悦和惆怅的成长已经成为一种可以被讲述的故事时，我们发现我们从未遵守过任何一个诺言，但我们真的真心真意相爱过。520，我爱你!

19、有你，雨水如此浪漫，有你，阳光如此灿烂，有你，甚至连风都如此温柔，有你，心里无时无刻都溢满了温暖。520我爱你，只愿此生唯牵你，共步时刻分秒钟。

20、我爱你，所以请你相信我，无论你给不给得了我你的一生，我都不会后悔。爱你就会懂得舍弃和放弃一些东西。

21、想你那是必须的，念你那是必然的，爱你那是必做的，时时刻刻祝福你那是必定的：愿我最心爱的你天天都有开心相伴，时时都有幸福相随。

22、自从有了你的出现，我飘泊不定的心便有了停靠的港湾，找到了对你的思念，从此寂寞和孤独不会再占据我的心田，爱你永远。

23、陪你走过山山水水，不累，只为微笑你的嘴;陪你渡喜喜悲辈，不悔，只为能感动你的泪。开心的你是我心中最美。520日，我爱你。

520秀恩爱晒图说说

1 爱情已插上了天使的翅膀，轻轻的飞到你我的身旁，将幸福与快乐赐予，将甜蜜与浪漫演绎，520我爱你，愿和你生生世世在一起!

2 如果世界只剩十分钟，我会和你一同回忆走过的风雨，如果世界只剩三分钟，我会吻你，如果世界只剩一分钟，我会对你说我爱你!

3 祝你快乐!情是心中的向往，是感觉的共鸣，是灵感的碰撞，是电光的闪耀，是甜蜜的琼浆，是醉人的纯酒。祝你情人节快乐!

4 情人节没赶上送花，妇女节送你3朵花。一朵玫瑰花，传情达意全靠它。一盒爆米花，小心吃成美食家。一朵女人花，祝你永远美丽顶呱呱!

5 曾经爱你，是真的;依然爱你，也是真的。情人节里，让我把这份爱汇成涓涓的祝福，真诚的祝福你幸福、快乐永远!

6 一声老婆我爱你，胜过千言和万语。一声老婆我想你，充满柔情和蜜意。一声老婆我谢你，你是天来也是地。老婆，有你真好!

7 天天看你，你是如此美丽;时时想你，你是如此魅力;分分念你，你是如此如意。520亲爱的我爱你，一生一世只爱你。

8 喜欢你，不要甜言蜜语，想着你，不要花言巧语，爱着你，不要欺骗话语。520我爱你，亲爱滴，今生你是我的唯一，对你只有一心一意。

9 初恋般的感觉真好，希望与你一生到老，愿意做你的依靠，我一定是你的非常可乐，非常选择!希望你能执我之手，与我携老。

10 谁在想念你、谁在牵挂你、谁舍不得你，谁离不开你，谁最了解你，谁最心疼你，谁最惦记你，谁在祝福你，不用想了，除了我还有谁!

11 爱是男儿膝下黄金，爱是女儿二八苏锦。爱是洱海苍山，爱是水枯石渐。爱是生命不休绵延不断，因此世上最好的胶叫“520”。

12 大胆表白，宁可无赖，真爱如海，行动要快，敞开胸怀，绝无人怪，春暖花开，情心翦裁，天高地远，无可替代。520，快向心爱的TA表白。

13 相遇相见，注定相知相恋;相思相念，注定相许相亲;相牵相伴，注定相惜相爱。520我爱你，愿一生一世永永远远和你相依相偎相眷相恋!

14 发发收收短信息;真情数字非机密，红尘红缘我和你;亲密爱人520，人海茫茫我牵你;爱情开起了party，浪漫男女我和你!

15 天天想着你的容颜你的笑。你的哭你的闹，我对你的爱对你的好，相见时看见你的天真和善良，让我深深的感动，难忘一辈子。

16 情人节，我愿做一条鱼，任你红烧、白煮、清蒸，然后躺在你温柔的胃里。520网络情人节快乐!

520朋友圈唯美文案短句

1一朵花儿开又一朵花儿败，满园的鲜花只有你是我的真爱……因为你最美最灿烂，因为你世界才这样可爱!亲爱的，今天是520，我要对你说我爱你!

2呼呼呼—是风吹起的声音;哗哗哗—是溪流动的声音;嗡嗡嗡—是蜜蜂叫的声音;怦怦怦—是我心跳的声音。我爱你—是短信到的声音，520等你爱我!

3情真真，意切切，一片相思几时休，月明人倚楼。情悠悠，思悠悠，爱到何时方始休，除非水倒流。520表白日，此生为你。

4相扶到老情不变，才是浪漫;死心塌地心不贪，才是蜜甜。相敬如宾真心处，才是满足;白头偕老不辜负，才是幸福。20我爱你，亲爱的，你是我捧在手心的宝，愿你开心快乐。

5520表白日，浪漫的日子里写下浪漫的诗句，你一句我一句，句句里面说出我爱你。把爱意藏于短信里，你一条我一条，条条爱意永不少。

6爱你在心间，你的冷暖是我的挂念;爱你在天天，你的身影充盈我的视线;爱你一年年，任沧海变桑田，此心到永远。20我爱你，一颗爱你的心，请你明鉴!

7不因忙碌而疏远，不因不联系而冷淡，你的喜怒哀乐冷与暖，时刻挂怀在心间。520爱的表白日，真挚的祝福传给你。

8有你，雨水如此浪漫，有你，阳光如此灿烂，有你，甚至连风都如此温柔，有你，心里无时无刻都溢满了温暖。520我爱你，只愿此生唯牵你，共步时刻分秒钟。

9宝贝：最近我牙齿痛，因为常常晚上想你，那感觉太甜蜜了，会蛀牙。520，祝你快乐!

10爱是一壶美酒，一饮就醉了;思念，是汹涌澎湃的大海，轻易就淹没了我;你，是朵娇艳的花，在我心中早已悄然开放!520，我爱你!

11浪漫的诗篇只为你诵读，甜蜜的乐章只为你演译，动人的’情话只为你诉说，真诚的爱恋只为你守候，520我爱你，我爱你，愿给为你打造一世幸福!

12无论哭笑，都有你的拥抱;无论出入，都有你做依靠;无论天涯还是海角，都有你陪我到老，亲爱的，5、20我爱你，愿你开心如意，享快乐天地。

13情人节没赶上送花，妇女节送你3朵花。一朵玫瑰花，传情达意全靠它。一盒爆米花，小心吃成美食家。一朵女人花，祝你永远美丽顶呱呱!

14我爱你，所以请你相信我，无论你给不给得了我你的一生，我都不会后悔。爱你就会懂得舍弃和放弃一些东西。

15520是一个美丽的日子。我没有惊天动地的爱情宣言，也没有海枯石烂的爱情承诺。但是，我想告诉你：我比上一秒钟更爱你!祝你快乐!

16今天是5月20日，想送你9个字：“不、远、一、变、爱、我、生、永、你”。你能把它们组成一句完整的话发回给我吗520，我爱你。

17520，想你在每一个有星星的夜晚;念你在每一刻欢乐的时光;盼你在每一次想你的瞬间;爱你在每一秒呼吸的间隙。网络情人节，爱你在心底!

18我只爱爱我的人，因为我不懂怎样去爱一个人，不爱我的人，是完全不知道从何着手。所以，我会全心全意用生命去爱你呵护你。

19我对你的爱如滔滔江水川流不息，又如黄河泛滥一发不可收拾，再如日落西山灿烂辉煌。我想你爱你，我不能没有你，我一定要得到你!

20不爱你是不行的，不爱你是有罪的，不爱你是可耻的，不爱你是痛苦的，520，我能有什么办法呢，只能选择爱你!有你的日子天天都是520!

21手心的温度，握着你手的时候才是暖的，因为热血沸腾了;嘴角的微笑，守着你心的时候才是纯的，因为智商变低了，呵呵，亲爱的，20我爱你，愿你幸福每刻，开心美秒。

22遇到你，是我一生的缘分;爱上你，是我一生的幸运;牵着你，是我一生的快乐;呵护你，是我一生的宿命。520我爱你，今生有你相伴，是我一生的幸福。

23幸福路，是快乐无尽头，希望有你;生活路，是好运来携手，希望为你;爱情路，是甜蜜到永久，希望是你。520我爱你，人生路上，只愿与你牵手!

24朋友很多，交心的没几个;知己很少，你是其一;人海中难的有几个真正的朋友，这份情深深埋在我心里。真诚的祝福我的朋友——我的知己：幸运快乐时时刻刻伴随你!

25手上青春还剩多少，思念还有多少煎熬，时光悠悠青春渐老，当我想起你的微笑，留下青春的线条，你的世界但愿都好。520，愿意跟我一起创造美好

26如果爱是忙碌，我愿做你的陀螺;如果爱是存折，我愿是你的银行;如果爱是快乐，我愿做你的开心果;如果爱是玫瑰，我愿是你的玫瑰园。

27认识你，“欢天喜地”。爱上你，“春风得意”。追求你，“信心无敌”。520我爱你，亲爱的，娶到你，幸福无比!

28陪你走过山山水水，不累，只为微笑你的嘴;陪你渡喜喜悲辈，不悔，只为能感动你的泪。开心的你是我心中最美。520日，我爱你。

29痴心的暗恋，是过去完成的时候;美好的回忆，是一般过去的时候;热烈的爱情，是现在进行的时候;坚贞的誓言，是一般将来时。如果今生不够，那就再加上来世!

30我爱你，我的世界只能靠你带来圆满;我爱你，我的幸福只能由你进行定夺;我爱你，我的心中只能将你深深珍藏。520日，我决定爱你到天长地久!

31520我爱你，把你捧在手心，呵护你;把你种在心田，疼爱你;把你印在脑海，思念你;给你发条短信，祝福你;愿你万事顺利，青春美丽。

32暖暖的阳光照耀你，柔柔的清风抚摸你，阵阵的细雨呼唤你，静静的夜里在想你，情人节来临，送你吉祥如意，愿你笑口常开……

33偶然间相遇，霎那间心动，从此吹响了月下的竹笛风，从此再不惧风风雨雨，山水重重。有你，春光盈盈;无你，满地残红。520日，我爱你。

34风吹草儿绿，雨润花儿开;在“520”的节日里，你我的爱情比草更绿，比花开更美!

35520：清早，我连发三条短信问候你;中午，我连发三条短信问候你;晚上，我连发三条短信问候你。亲爱的：三三九九=生生久久=长长久久我爱你!

36520!我爱你!ILOVEYOU!我有一份爱，说与你请听：缘份随我你，古今中外情;我的爱是你，短信传真情;百年渡同船，一生一世情。

37想你，是我的生活习惯;梦你，是我的睡前心愿;爱你，是我的心甘情愿;娶你，是我的期盼。今天5月20日，我要大声说：520，我爱你!

38喜欢你，不要甜言蜜语，想着你，不要花言巧语，爱着你，不要欺骗话语。520我爱你，亲爱滴，今生你是我的，对你只有一心一意。

39当我们满怀喜悦和惆怅的成长已经成为一种可以被讲述的故事时，我们发现我们从未遵守过任何一个诺言，但我们真的真心真意相爱过。520，我爱你!

40有人说“爱恨情愁”：爱的旁边是恨，情的旁边是恨与愁。但是我要帮你改成“爱爱情爱”，让爱的旁边站着爱，情的旁边全是爱。520，愿你爱得精彩。

作用机制：病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应，其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA，即siRNA。

siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA再与体内一些酶（包括内切酶、外切酶、解旋酶等）结合形成RNA诱导的沉默复合物。

RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合，RISC具有核酸酶的功能，在结合部位切割mRNA，切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解，从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。

siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA，而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶作用下合成更多新的dsRNA，新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA，从而使RNAi的作用进一步放大，最终将靶mRNA完全降解。

RNAi的临床应用

RNAi 机制可作为真核生物的基因组免疫系统 , 抑制外源和内源有害基因的表达。人类目前对病毒 ( 如 HIV) 所致疾病缺乏理想的治疗方法 , 如果利用 RNAi 技术把与病毒基因具同源性的 siRNA 引入感染细胞将会抑制病毒的增殖 , 这为病毒相关疾病的治疗提供了新的思路。

另外 , 利用 RNAi 技术还可以高效、特异、快速的抑制细胞内癌基因的表达 , 人类的许多癌症是由于少数癌基因超表达导致细胞过度增殖所致 , 如果利用 RNAi 技术抑制过度表达的癌基因将会使癌症表型逆转或病程得以控制。

可以预测 , RNAi 技术将会很快应用于癌症和病毒疾病的治疗 , 并可能会为这些疾病治疗带来突破。