盐析法得到的蛋白质如何脱盐

常用的是凝胶过滤层析脱盐，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

蛋白质溶液中盐分子和蛋白质分子大小相差较大，盐分子较小，会随着层析流动相进入孔径较小的固定相，在层析中迁移速率小，而蛋白质分子尺寸较大，不能随流动相进入固定相，迁移速率大，首先从层析术中流出，实现脱盐。

扩展资料

盐析作用的实质是高浓度的强电解质破坏蛋白质分子表面的水化膜，同时电解质离子中和了蛋白质所带的电荷，蛋白质的稳定因素被消除，使蛋白质分子相互碰撞而凝聚沉淀。

蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。

同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。

由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

--脱盐比

--凝胶过滤层析

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一种用于脱盐的化学剂

实验十九 血清γ--球蛋白的提取及鉴定

[原理]

用CAME可将血清蛋白分为清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五个组分。其中γ--球蛋白是一类结构及功能相似的蛋白质，这些蛋白质都具有免疫功能，对机体起防卫作用，是免疫球蛋白的主要部分。

γ--球蛋白分子由四个亚基组成；大多数γ--球蛋白的分子量为

150 000左右， pI在6．3－7．3范围；血清中γ--球蛋白的含量为 7－ 15g／L（即 700－ 1500mg/dl）。

用盐析法沉淀血清蛋白质时，γ--球蛋白在（NH4）2SO4达到33％饱和度时即可首先沉淀下来而与其他血清蛋白分离。若使用层析法进一步纯化，即可得到纯度较高的γ--球蛋白。这是许多抗体提取的基本方法。

操作

l．盐析法提取γ--球蛋白

（ l）盐析：在大塑料离心管内加入猪（或人）血清 6ml， PBS（0． 1mol/L， PH7． 4）6ml，混匀。再逐滴加入6ml饱和硫酸铵溶液，边加边摇匀。静置30分钟。离心（3 000r／min， 10分钟）取沉淀。

（2）再盐析：将上述沉淀用 3ml PBS溶解后，逐滴加入饱和硫酸铵2ml，边加边摇匀。移至小离心管（或小试管）中，静置半小时，离心（3 000r／min，15分钟），留取沉淀。用 lml蒸馏水溶解沉淀物制成初步纯化的γ--球蛋白。

2．用SepadexG－25脱盐

（l） SepadexG－25的预处理：称取干胶3g置于 100ml烧杯中，加 60ml蒸馏水。煮沸 1时（注意切勿煮干）。室温冷却后倾去上清液；再加入 PBS 20ml，搅匀。

(2）装柱：将经预处理的 SepadexG－ 25装人 10cm x 20cm的层析柱待用。凝胶柱表面应在层析柱上口以下约4－5cm。

（3）上样：用经盐析取得的初步纯化的γ--球蛋白液 lml上样。方法：打开层析柱下夹，让凝胶表面的液体正好流完，关闭下夹。用滴管将样品沿管壁加在凝胶表面，打开下夹，使样品缓慢地全部进入凝胶柱内。用l－2mlPBS轻轻冲洗柱壁，并使其缓缓流入凝胶柱内，关闭下夹。在凝胶柱表面加入少量PBS，使液柱高2－3cm。

(4)洗脱及收集（图8一1）：打开下夹，在上口源源不断加入PBS进行洗脱。大分子γ--球蛋白先被洗脱流出，小分子(NH4)2SO4最后被洗脱流出。洗脱速度不应大于lml/min。对流出液进行分部收集（用部分收集器或用人工方法收集于小试管中），20ml/管。收集若干管（若部分收集器带有紫外监测仪，应收集到 A280＜ 0．01＝收集完毕，用20－30ml PBS缓冲液冲洗胶柱。未待凝胶柱表面PBS流尽，即关闭下夹。

（5）收集液检查：将各管收集液各一滴，滴于白瓷反应板的二个孔内。一孔用于检查NH4+，另一孔用于检查蛋白质。

检NH4+孔：加入一滴纳氏试剂。有N H4+者产生棕红色沉淀。

检蛋白孔：加入一滴双缩脲试剂。有蛋白者产生紫色。

（6）汇总收集液：将蛋白含量高而基本无NH4+的各管收集液汇集于大试管中，并量其体积。含蛋白的收集液为白色浑浊状。

3．浓缩 向蛋白收集液中按0．2g／ml加入SepadexG－25干胶（G－50用量可减至0．10g／ml），振摇5分钟后用 3 000r／min离心 5分钟，取上清液。

此浓缩过程具有进一步脱盐的作用。

4．DEAE纤维素柱层析——进一步纯化

(1) DEAE纤维素的预处理、平衡及装柱：请参阅实验十四。柱大小约为 1．5cm x40cm（容积约70ml）。

(2)加样：上述浓缩的γ--球蛋白收集液除留下5滴待电泳检测外，其余全部用于加样，方法同脱盐。

（3）梯度洗脱及分管收集（图8－2）：用0．01mol/L Na2HPO4（pH8）及05mol/LNaH2PO4（pH4）各80ml进行梯度洗脱（离子强度逐步升高； pH逐步下降）。用部分收集器分部收集： 0．5ml／min、4ml/管。共收集约40管。

5．浓缩汇总第一蛋白高峰的各管并进行浓缩。方法同步骤3。

6．脱盐方法同前，收集含蛋白部分。

7．浓缩方法同前，浓缩液中含纯度较高的γ--球蛋白。

注：DEAE－C柱层析收集液中含盐较少，已浓缩过程已部分脱盐，故时间不充裕时可免去6，7两步。

8．CAME检测取三张醋酸纤维薄膜，分别以原血清、操作3的浓缩液、操作5（或操作7）的浓缩液点样。电泳方法同实验四。用PAGE检测，分辨率更高。

9．结果判断提取物的电泳图谱上只有γ--球蛋白区带。

试剂

1．血清（人、兔、猪的无溶血血清）。

2．0．0lmol/L磷酸盐缓冲液（PBS），pH7．4。

3． 0．01mol／L Na2HPO4（pH8）。

4． 0．5mol/L NaH2PO4（pH4）。

5• SepadexG－ 25

6．奈氏（Nessler）试剂。

7．双缩脲试剂（见实验三）。

8．电泳试剂同实验四。

9．饱和硫酸铵溶液。

仪器

层析柱、部分收集器、白瓷反应板、紫外分光光度计（或紫外监测仪）、电泳设备。

焦油脱盐主要方法有：1)在回收鼓风冷凝工段采取循环氨水和冷凝氨水混合的工艺流程，降低固定铵盐的浓度;2)采用焦油洗萘流程的粗苯工段，由于焦油中大量铵盐进入终冷循环水中，可降低焦油中的含盐浓度;3)焦油在进入管式炉前加入碳酸钠，使固定铵盐转化为不易分解的钠盐。例如：NH4CL+Na2CO3 NaCL+NH3+CO2+H2O 2NH4CL+Na2CO3 (NH4)2CO3+2NaCL

　　脱盐水（desalted water）是将所含易于除去的强电解质除去或减少到一定程度的水。脱盐水中的剩余含盐量应在1～5 毫克/升之间。

　　制取脱盐水的方法主要有以下三种：

　　①蒸馏法，使含盐的水加热蒸发，将蒸气冷凝即得脱盐水；

　　②离子交换法，使含盐的水通过装有泡沸石或离子交换剂的交换柱（见离子交换），钙、镁等离子留在交换柱上，滤过的水为脱盐水；

　　③电渗析法，借离子交换膜对离子的选择透过性，在外加电场作用下，使两种离子交换膜之间的水中的阳、阴离子，分别通过交换膜向阴、阳两极集中。于是膜间区成为淡水区，膜外为浓水区。从淡水区引出的水即为脱盐水。

　　蒸馏法多用于实验室用来洗刷容器或制备溶液，适用于量不多纯度要求较高场所。离子交换法与电渗析法多用于化工业如锅炉用水可以减少结垢和腐蚀，适用于量大纯度要求不是很高的场所。

积盐、压盐、脱盐都是指在食品制作过程中采取的不同措施。

1 积盐：在一些食品的制作过程中，需要添加盐来增加味道。在添加盐时，可能会采取积盐的措施，即先将盐堆积在食材的某个部位（如表面、角落等），然后再进行后续的制作步骤。

2 压盐：在一些需要腌制的食品中，为了更好地入味，可能会采取压盐的措施，即用重物将盐压在食材上面，使盐更好地渗透到食材中。

3 脱盐：在一些土壤中，可能会存在过多的盐分，使得土地条件恶化，不适合种植作物。在这种情况下，可以采取脱盐的措施，即通过一系列方法（如灌溉、换土等）将土壤中的盐分去除，使土地恢复正常的土壤条件，适合种植作物。

需要注意的是，以上措施在实际应用中可能存在一些差异，具体应根据实际情况而定。

脱盐粗范地说就是将“盐”脱除的方法或过程，这个“盐”是更宽泛的“化学盐”不只常用的食用“盐”。脱盐简单地说就是去除水中的阴阳离子。脱盐的方法有电渗析和反渗透法及新近重新热火起来的正向渗透等。