问一下生化高手，蛋白质分离和提纯的几个技术怎么样去学习和理解更有效，求大神帮忙，感激不尽

首先在目的蛋白上加一个标签，这个标签很小，不会对你的蛋白性质产生很大的影响。

标签会对某种物质特异性结合，我们通常把这种物质称为beads/柱子。那么可以想象，一大堆蛋白混合物与beads孵育后，含有标签的目的蛋白就会与beads结合，另外一些杂蛋白也有可能与beads结合。

然后用洗脱液进行洗脱，一般的蛋白纯化中都会用到两种洗脱液，我们姑且把它分为A类和B类。A类洗脱液洗脱能力不强，只会把那些结合在beads上，但结合能力不强的杂蛋白洗下来；B类洗脱液洗脱能力强，可以把含有标签的目的蛋白从beads上洗下来。从而达到了分离纯化的目的。

一般来说蛋白纯化都是基于这个原理，至于上面提到的与beads特异性结合，其中的原理有很多种，例如金属离子亲和，抗原-抗体亲和等等。洗脱的原理有低盐浓度洗脱液洗脱杂蛋白，高盐浓度洗脱液洗脱目的蛋白等等。

另外，如何在目的蛋白前面加上标签，现在商业化的载体都能很轻松的达成，例如pET系列可以加His标签，可与Ni离子亲和；pTYb系列则通过Chitin binding特异性结合；pGEX系列带有的是谷胱甘肽GST标签等等。

蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。

是根据蛋白质的理化性质将蛋白从组织或细胞中分离出来获得纯度较高的蛋白

提取就是将蛋白从组织里采用一定的方法分离出来；一般植物组织或是动物组织中都有脂肪，核酸等物质，提取液中含有大量杂质，分离即是将蛋白与这些杂质分离开；纯化是为了将分离过程中残留的那部分杂质去除，进一步提高蛋白纯度。

1、这个你有必要去了解下电泳的原理，事实上，胶体具有电泳现象，而蛋白能是一种生物大分子，能够配成胶体溶液。电泳时，通过一定手段（加热等）使蛋白质带上电荷，那样在电场中能够定向移动。而蛋白质所带电荷，蛋白质分子量的大小以及结构等会影响迁移的速率

2、双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。

3、原理：用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来，实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。(1)单向电泳：采用完整的蛋白质或用十二烷基磺酸钠(SDS)处理的蛋白质的单向泳动，在有凝胶的平板上平行分离(过去也有用在玻管中的圆筒形棒状凝胶进行电泳的，现已很少有人使用)。(2)双向电泳：首先用天然蛋白质进行分离，然后凝胶平板再用SDS处理，样品便在第二向得到分离。第一次分离了各种各样的蛋白质，因此第二向分离的是蛋白质亚基

SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。