试述“OT”试验的原理、方法、结果、意义和应用原则？

（1）原理：结核菌素试验属于迟发型超敏反应，用结核菌素试剂作皮肤试验，感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗者，一般都出现阳性反应。

（2）方法：取5UPPD或OT01ml注射于前臂掌侧皮下，经48—72h检查反应情况。应特别注意局部有无硬结，不能单独以红晕为标准。

（3）结果分析：

①阳性 注射部位硬结、红肿直径0．5—1．5cm之间。这表明机体曾感染过结核，出现超敏反应，但不表示正患结核病；

②强阳性 硬结直径超过1．5cm以上，表明可能有活动性结核，应进一步检查；

③阴性 注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于0．5cm，说明无结核感染，但应考虑下述情况：如受试者处于原发感染的早期，或正患有其他传染病(如荨麻疹等)、霍奇金病、结节病、艾滋病。

（4）应用：

①选择BCG接种对象及测定接种效果，结核菌素反应阴性者应接种BCG；

②结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用；

③可在未接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；

④可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。

扩展资料

1、用于诊断与鉴别诊断

结核菌素试验对青少年、儿童及老年人结核病的诊断和鉴别有重要作用，是较为重要的辅助检查方法。

2、为接种卡介苗提供依据

如结核菌素试验阳性时，表明体内已感染过结核菌，无须再接种卡介苗。结核菌素试验阴性者为卡介苗的接种对象。

3、为测定免疫效果提供依据

一般在接种卡介苗3个月以后做结核菌素试验，了解机体对卡介苗是否产生免疫力。如结核菌素试验阳性，提示卡介苗接种成功，反之需重新再进行卡介苗接种。

-结核菌素试验

Allen试验主要用于检查手部的血液供应，桡动脉与尺动脉之间的吻合情况。具体步骤如下：

1术者用双手同时按压患者一侧桡动脉和尺动脉；

2嘱患者反复用力握拳和张开手指5～7次至手掌变白；

3松开对尺动脉的压迫，继续保持压迫桡动脉，观察手掌颜色变化。

若手掌颜色<10s迅速变红或恢复正常，即Allen试验阳性,可以经桡动脉进行介入治疗，一旦桡动脉发生闭塞也不会出现缺血；；相反，若10s手掌颜色仍为苍白，即Allen试验阴性,这表明手掌侧支循环不良，不应选择桡动脉行介入治疗  。

《中国医学生临床技能操作指南》是2012年人民卫生出版的图书，教育部医学教育临床教学研究中心专家组编。

《教育部临床能力认证系列丛书:中国医学生临床技能操作指南》强调扎实掌握临床基本技能操作是培养医学人才的核心目标，力求确立临床技能培养在高等医学人才教育和培养中的核心地位，建立临床实践教学的示范工程，构建临床技能培养标准化体系，深化临床实践教学改革，推进实践教学内容和实践模式的发展。

参考资料

教育部医学教育临床教学研究中心专家组 编 人民卫生出版社北京：人民卫生出版社，2012-3

（一）双抗体夹心法

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

（二）双位点一步法

在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

（三）间接法测抗体

间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

（四）竞争法

竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：

（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。

（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

（五）捕获法测IgM抗体

血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

（1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

（2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

（3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

（4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

（六）应用亲和素和生物素的ELISA

亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量24431，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。

亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号

肢体抬高试验(Buerger试验)阳性是（）

A下肢先抬高30。，后下垂，肤色由白变紫

B下肢先抬高30。，后下垂，肤色由黄变白

C下肢先抬高45。，后下垂，肤色由白变红

D下肢先抬高60。，后下垂，肤色由黄变红

E下肢先抬高70。~80。，持续60秒，出现麻木、疼痛、苍白或蜡**者

正确答案：E

（1）青霉素G钠（钾）

　①皮试溶液的配制a用lml注射器取每毫升含20万u的青霉素溶液0lml，加注射用水或生理盐水至lml，摇匀即成（含青霉素2万U）。

　b取上液0lml＆上法稀释至lml（含青霉素2000u）。

　c取每毫升含青霉素2000u的溶液0sml按上法稀释至2ml，摇匀即成（含青霉素500u）。

　②皮试方法及结果观察（皮内试验）

　a用75％酒精消毒前臂屈侧关节上66cm处皮肤。

　b抽取皮试液0lml（合青霉素50u），作皮内注射成一皮丘（小儿注射002—003ml）。

　c等20min后，如局部出现红肿，直径大于1cm或局部红晕或伴有小水泡者为阳性。对可疑阳性者，应在另一前臂用生理盐水做对照试验。

　③注意事项a极少数患者可在皮肤试验时发生过敏性休克，常于注射后数秒至5min内开始。先是皮肤蜃痒、四肢麻木，gy则气急、胸闷、发给、心跳加快、脉细、血压下降、大量出汗等。如不及时抢救，可导致病人死亡。应做好抢救准备，如盐酸签上腺素肌注；氢化可的松静滴；及10％葡萄糖酸钙液与高渗葡萄糖液20ml缓慢静注；以及使用中枢兴奋药和抗过敏药。

　b试验用药含量要准，配制后在冰箱中保存不应超过24h，注射器应用lml刻度者。

　C更换同类药物或不同批号或停药3天以上，重新作皮内试验。

　（2）头胞菌素（先锋霉素）

　①皮试溶液的配制取头抱菌素05g加生理盐水5ml溶解，然后抽取0lml稀释至5ml后，再抽取015ml稀释至5ml即成（每毫升含头抱菌素60ug）。

　@pagebreak@②应试方法及结果观察每次取应试液0lml做皮内试验，具体操作及结果观察均同青霉素试验。

　注：也有的医疗单位采用每毫升含025、03、05mg浓度的头泡菌素为皮试液。每次抽取005—0lml作皮试。

　（3）链霉素

　①皮试溶液的配制a取链霉素1g（100万u）加生理盐水3sml溶液后即成4ml（每毫升含25万u）。

　b取a液0lml加生理盐水稀释至lml（每毫升含25万U）。

　c取b液0lml加生理盐水稀释至lml（每毫升含2500U）。

　d取c液0Zml加生理盐水稀释至lml（每毫升含500u）即得。

　②皮试方法及结果观察取度试液0lml做皮内试验，观察15—20min具体皮试方法及结果观察均同青霉素试验。

　③注意事项a皮试阴性的病人，注射时也可发生过敏反应，故应做好抢救准备。

　b皮试方法目前全国尚不统一，已规定要做皮试的。地区，应按规定进行。

　（4）结核苗素

　①皮试溶液的配制取纯结核菌素05ml加生理盐水45ml为第一号溶液，其稀释度为1：10依上法配制第2、3、4号溶液。

　②皮试方法及结果观察。

　选择前臂屈侧关节上66cm处，消毒后皮内注射01ml结核菌素液，使之成一皮丘。通常从1：1000开始，如无反考试，大收集整理应可用较大浓度。最后判断小儿有无结核菌感染，需做1：100浓度的试验。如患儿有疱性结膜炎、皮肤结节性红斑或胸腔积液，应从1：10000开始。注射后48一72h观察反应强度，并以（＋）号表示之。

　@pagebreak@阴性：不发红和硬结直径不超过05cm或仅发红而无硬结。

　可疑：（t）发红和硬结直径为0scm以下。

　阳性：（＋）发红和硬结直径为05—0gcm（＋＋）发红和便结直径为1—1gcm（＋＋＋）发红和硬结直径为ZCin以上。

　（＋＋＋＋）除发红和硬结外有水泡或坏死。

　③注意事项巳稀释后的结核菌素液，在冰箱内可保存6周。如发生沉淀或变**则不能用。

　（5）破伤风抗毒素

　1、皮试液的配制取破伤风抗毒素1500u，抽取01ml加生理盐水稀释至1ml既成。

　2、皮试方法及结果观察取皮试液01ml在前臂作皮内试验，15min后观察，局部红肿在1cm以上为阳性。必要时应以生理盐水在另一前臂做对照试验。

　3、注意事项若皮试为阳性，也可用脱敏法进行注射。第1针用1：20稀释血清005ml；第2针用1：10稀释血清005ml；第3针用未稀释血清0lml，第4针用未稀释血清0smll第5针将余量一次肌内注射。每针间隔20min，无反应可注射。但在注射前要做好过敏性休克的抢救准备。

　注：白喉抗毒素、多价精制气性坏疽抗毒素、精制肉毒抗毒素，其过敏试验均同破伤风抗毒素。

　（6）盐酸普鲁卡因

　①应试溶液的配制@pagebreak@将盐酸普鲁卡因配制025％溶液即成。

　②皮试方法及结果观察取皮试液0lml在前臂作皮内试验，15—20min后观察结果。其判断标准同青霉素皮肤试验。

　（7）细胞色素C

　①皮试溶液的配制用原药液。

　②皮试方法及结果观察a划痕法：用本品1滴于前臂内侧皮肤上划痕，使之少量出血，20min后观察，如发红在10mm以上或肿胀在7mm以上为阳性。

　b皮内法。将本品稀释为003mg／ml，在前臂皮内注射003—005ml，20min后，发红直径在15mm以上或肿胀在10cm以上为阳性。

　c点眼法：将浓度为5mg／ml本品1滴，滴于眼结膜上，20min后，结膜充血、水肿、痒者为阳性。

　③注意事项据报道偶可引起过敏反应，尤其是停药后再用该药时。

　（8）有机碘造影剂（碘吡啦啥，醋碘苯酸钠，泛影钠，泛影葡胺，胆影钠，碘化油等）

　①度试溶液的配制用30％有机碘溶液。

　②皮试方法及结果观察：a静注法：用30％有机碘溶液lml静注，密切观察20min，注意有无心脏、颊膜水肿、恶心、呕吐、尊麻疹、血压下降及其它不适等反应。如有上述现象不可注射。

　b日含试验法：用1—5ml造影剂含于口中，5min后观察有无上述反应。

　c皮内试验法：用005一0lml造影剂在前臂作皮内试验，10一15min后观察，有1cm大小的红斑反成即为强阳性。

　@pagebreak@d结膜试验法。用1—2滴造影剂滴入一侧眼结膜囊内，lmin后观察结膜与巩膜充血情况，如有显著充血（与对侧对比）、血管扩张、曲张，即为强阳性。

　③注意事项过敏试验阴性者，在碘造影过程中仍可出现过敏反应，必需注意。

　（9）门冬酰胺酶

　①皮试液的配制a取门冬酸胺酶1000u加生理盐水lml溶解后即成1000u／ml。b取上液0lml加生理盐水稀释至lml即成。

　②皮试方法及结果观察取皮试液0lml在前臂作皮内试验，结果判断同青霉素皮试。阳性者不可田。

　③注意事项a不同药厂、不同批号产品的纯度和过敏反应均有一差异，使用时必须慎重。

　b有过敏史的病人应十分小心或不用。

　（10）精制抗蝮蛇毒血清

　①皮试溶液的配制取本品0lml加生理盐水稀释至2ml即成。

　②皮试方法及结果观察取皮试液005ml作皮内试验，20—30min后观察，在正在1cm以内，周围无红晕及伪足状者为阴性。若疑为阳性者可先注射扑尔敏10mg，15min后再用脱敏法给药。脱敏注射法：本品用生理盐水稀释20倍，第一次注射04ml，每次观察10—20m1n，如无反应可酌情增量，注射3次以上无反应时可注射。如有异常反应，立即停止注射，可用地塞米松或氢化可的松流用酸钠注射液静注抗过敏。

　注：精制抗五步蛇毒血清和精制抗银环蛇毒血清过敏试验同抗蝮蛇毒血清。

　（11）精制抗炭疽血清

　①皮试溶液的配制取本品0lml加生理盐水稀释至lml即成。

　②皮试方法及结果观察取应试液005ml在前臂作皮内试验，30min后观察，无明考，试大收集整理显反应者为阴性。如出现皮丘增大、红肿、浸润、形似伪足或有库感为阳性反应，须脱敏注射。

　脱敏注射法；用生理盐水10倍稀释血清，第一次注射稀释血清02ml、第二次注射04ml、第三次注射08ml每次注射后30min观察，如无反应，可将安缅中未稀释的全部血清肌注。有过敏史或过敏试验强阳性者。应将第一次注射量及以后的递增量减少。

　注：精制抗狂犬病血清过敏试验同精制抗炭疽血简。溢一敏注射法亦同，仅用量第一次为lml，每次增加lml至4ml止。

都是检查下肢静脉功能的试验

交通静脉瓣膜功能试验(Pratt试验)：病人仰卧，抬高下肢，在大腿根部扎上止血带，然后从足趾向上至腘窝缠缚第一根弹力绷带，再自止血带处向下，缠绕第二根弹力绷带；让病人站立，一边向下解开第一根弹力绷带，一边向下缠缚第二根弹力绷带，如果在第二根绷带之间的间隙内出现曲张静脉，即意味该处有功能不全的交通静脉。

深静脉通畅试验(perthes试验): 用于检查深静脉是否通畅，是决定原发性下肢静脉曲张手术与否的关键检查。方法是患者站立，在患肢大腿上1/3处扎止血带，阻断大隐静脉向心回流，然后嘱患者交替伸屈膝关节10～20次，以促进下肢血液从深静脉系统回流，若曲张的浅静脉明显减轻或消失，表示深静脉通畅；若曲张静脉不减轻，甚至加重，说明深静脉阻塞。Perthes试验阳性见于深静脉阻塞，为大隐静脉高位结扎的禁忌证。

大隐静脉瓣膜及大隐静脉与深静脉间交通支瓣膜功能试验（Trendelenburg试验）患者仰卧，患肢抬高，使曲张静脉空虚，在大腿上1/3处扎一根橡皮止血带，阻止大隐静脉血液倒流然后让患者站立，30秒钟，松解止血带，密切观察大隐静脉曲张的充盈情况:

①松解止血带前，大隐静脉萎隐空虚当松解止血带时，大隐静脉立即自上而下充盈，提示大隐静脉瓣膜功能不全，而大隐静脉与深静脉之间的交通支瓣膜功能正常

②在松解止血带前，大隐静脉已部分充盈曲张，松解止血带后，充盈曲张更为明显，说明大隐静脉瓣膜及其与深静脉间交通支瓣膜均功能不全

③未松解止血带前，大隐静脉即有充盈曲张，而松解止血带后，曲张静脉充盈并未加重，说明大隐静脉与深静脉间交通支瓣膜功能不全，而大隐静脉瓣膜功能正常